核酸检测步骤与流程

近日新冠变异病毒在全国各地疯狂传播，在疫情施虐下小嘚咕也和大家一样，加入到每天“一扣”（核酸检测）的队伍中，在每天配合社区进行全员检测过程中，很多人对核酸检测的流程步骤不是很清楚，所以我迅速查阅资料，给大家科普一下新冠核酸检测流程。

检测原理

检测新型冠状病毒特异序列的方法最常见的是荧光定量PCR（聚合酶链式反应，曾获诺贝尔奖）。因为核酸标本并不能直接测试，而是要先提取核酸，对其进行扩增。每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子产生。通过不断的比对监测值与预先设定的阈值的循环数（Ct值）来反映病毒浓度。这个扩增过程是一个比较耗时的过程，而且检测标本一旦进入扩增环节就不能停止。荧光定量PCR检测技术是20世纪80年代中期发展起来的一项体外核酸扩增技术，它可以将目标基因片段于数小时内扩增百万倍至数亿倍，成为当今生命科学研究最为重要且广泛使用的技术手段之一。

检测目标

在鼻咽拭子、痰或其他下呼吸道分泌物、血液、粪便、尿液等标本中，可以检测新冠病毒核酸。核酸检测会受到病程、标本采集、检测过程、检测试剂等因素影响。为了提高检测阳性率，应规范采集标本，采集标本后应尽快送检。由于试剂本身的阳性判断值特性，所以会受体内存干扰物质影响，如类风湿因子、溶菌酶，还有标本存放时间过长等，都可以使抗体出现假阳性，所以不单独以血清学检测作为诊断依据，为降低偶然因素影响，增加检测次数可以降低误报情况。

检测类型

目前检测类型分为“混采”和“单采”，顾名思义混采是相对于“单采”而言的，是将10个人的采集拭子放在一个采集管中，检测结果为阴性时，代表这些人都是安全的。如果出现阳性，我们则会立即对这个混采管的10个受试者暂时单独隔离，并重新采集单管拭子进行复核，来确定谁是阳性，一般社区“混采”方式较多，检测速度快、成本相对低，适合大范围短时间筛查排除疑似人群。“单采”方式是每人一个采集管，单独测试重点排查。初期只有“单采”可以出具检测凭证，现在很多地区也可以为“混采”人员出具阴性报告了。

检测步骤

1、标本采集：咽拭子标本采集，这是核酸检测流程的第一步，采集完的标本要迅速放入样本保存管中，保存管内红色保存液具有灭活病毒的作用，可以保证检测标本在送往检测点过程的有效性。

2、标本转运：标本在严密包装下被护送到实验室，在运输全过程中有严格的保护措施，即防止标本损坏同时也要保证安全无泄漏。

3、标本录入：工作人员逐一拆开包装，将每一份标本的信息录入系统，这个“登记”的过程，也是为了更好地对接大家的后续报告和健康码。

4、提取核酸：专业技术人员将标本里面核酸提取出来，检验人员戴着双层手套，在生物安全柜内一管一管地拧开螺旋盖，手工吸取样本，加入核酸提取板孔中，再拧上螺旋盖将标本放回原处。“有多少份样本就有多少次的重复操作“，这过程是检测中最危险与繁杂的过程。每天面临大量的检测标本。

5、配制试剂：多少份标本就需要配制多少份试剂，多少份EP试管，又是几千个枪头的工作量，全手工分装。

6、加样：提取好的核酸只需要加入5ul进入试剂体系进行扩增。5ul什么概念？一滴水的十分之一（大概20滴水是1ml）。检验人员要用极小的枪头将每个提取好的核酸，“不能出错，不能有遗漏，不能发生生物安全事故”可以说检验人员全身时刻处于高度紧张的状态。

7、上机检测：经过复杂的前期制备工作，才能在PCR仪上进行扩增检测。上机后，就是历时约1.5小时扩增检测，而且中间不能有停顿、不能有断电、不能有仪器故障，核酸检测才能完成。当反应管在机器上开始检验后，也就意味着“开弓没有回头箭”——从采样到核酸制备任何一个缓解出现问题都可能导致返工重测，从而使报告时间加倍。

8、输出报告：走完上述步骤后，检测人员需要对扩增结果进行分析，包括同批随样本检测的阴阳性质控结果是否在控、基线设置、逐孔分析内标及样本结果是否正常等。当阴阳性质控全部符合检测要求，排除假阴性、假阳性可能，对异常结果样本及时进行复核，确保无误后才能最终报告结果，并上传到健康码管理中心，完整的报告才能发布到用户手机中，而这份报告的背后融入了无数医疗工作者的汗水，真正的来之不易。

在本次疫情下，政府倡导群众“应检尽检”，很多人可能不理解甚至认为“小题大做”，而当我们了解这一份报告的背后需要有多少人付出，也让我们更加珍惜眼前这份健康。政府在倾尽全力保障群众安全，降低疫情对社会的冲击。让我们众志成城一起再次打赢这场疫情攻坚战。

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